Produkten
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR Deteksjekit foar 2019-nCoV
Ferwachte gebrûk
Dizze kit wurdt brûkt foar de kwalitative deteksje fan nij coronavirus (2019-nCoV) mei help fan keelútstrijkjes, nasofaryngeale útstrijkjes, bronchoalveolêre lavagefloeistof, sputum. It deteksjeresultaat fan dit produkt is allinich foar klinyske referinsje, en it moat net brûkt wurde as it ienige bewiis foar klinyske diagnoaze en behanneling. In wiidweidige analyze fan 'e tastân wurdt oanrikkemandearre yn kombinaasje mei de klinyske manifestaasjes fan' e pasjint en oare laboratoariumtests.
Ynspeksjeprinsipe
De kit is basearre op ien-stap RT-PCR-technology. Eins waarden de ORF1ab- en N-genen fan it nije coronavirus fan 2019 (2019-nCoV) selektearre as de amplifikaasjedoelregio's. Spesifike primers en fluorescerende probes (N-genprobes binne markearre mei FAM en ORF1ab-probes binne markearre mei HEX) binne ûntworpen om RNA fan it nije type coronavirus fan 2019 yn samples te detektearjen. De kit befettet ek in endogeen yntern kontrôledeteksjesysteem (ynterne kontrôlegenprobe markearre mei CY5) om it proses fan samplesamling, RNA- en PCR-amplifikaasje te kontrolearjen, wêrtroch falsk-negative resultaten wurde fermindere.
Haadkomponinten
| Komponinten | Folume(48T/Kit） |
| RT-PCR-reaksje-oplossing | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RNAseP Gene) | 864µl |
| Negative kontrôle | 1500µl |
| nCOV Positive kontrôle（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Eigen reagentia: RNA-ekstraksje of suveringsreagentia. Negative/positive kontrôle: De positive kontrôle is RNA mei it doelfragmint, wylst de negative kontrôle nukleïnezuurfrij wetter is. Tidens gebrûk moatte se meidwaan oan 'e ekstraksje en moatte se as besmetlik beskôge wurde. Se moatte behannele en ôffierd wurde neffens relevante regeljouwing.
It ynterne referinsjegen is it minsklike RnaseP-gen.
Bewaringsbetingsten en ferfaldatum
-20 ± 5 ℃, foarkom werhelle befriezen en ûntdooijen mear as 5 kear, jildich foar 6 moannen.
Tapasse ynstrumint
Mei FAM / HEX / CY5 en oare multi-kanaals fluoreszint PCR-ynstruminten.
Easken foar eksimplaren
1. Tapasselike specimentypen: keelstôkjes, nasofaryngeale stôkjes, bronchoalveolêre lavagefloeistof, sputum.
2. Spesimenkolleksje (aseptyske technyk)
Faryngeale swab: Feie de amandelen en de efterste faryngeale muorre mei twa swabs tagelyk ôf, en dompelje dan de swabkop yn in reageerbuis mei de samplingoplossing.
Sputum: Nei't de pasjint in djippe hoest hat, sammelje it ophoaste sputum yn in reagearbuis mei skroefdop mei de samplingoplossing; bronchoalveolêre lavagefloeistof: Sampling troch medyske professionals. 3. Bewarje en ferfier fan samples
Eksimplaren foar firusisolaasje en RNA-testen moatte sa gau mooglik test wurde. Eksimplaren dy't binnen 24 oeren ûntdutsen wurde kinne, kinne opslein wurde by 4 ℃; dyjingen dy't net binnen 24 oeren ûntdutsen wurde kinne, kinne bewarre wurde by 4 ℃.
oeren moatte wurde opslein by -70 ℃ of leger (as der gjin opslachbetingsten fan -70 ℃ binne, moatte se wurde
tydlik opslein by in kuolkast fan -20℃). Eksimplaren moatte foarkomme dat se werhelle befrieze en ûntdooije tidens ferfier. Eksimplaren moatte sa gau mooglik nei it sammeljen nei it laboratoarium stjoerd wurde. As samples oer lange ôfstannen ferfierd wurde moatte, wurdt opslach mei droech iis oanrikkemandearre.
Testmetoaden
1 Sampleferwurking en RNA-ekstraksje (sampleferwurkingsgebiet)
It is oan te rieden om 200 μl floeibere stekproef te nimmen foar RNA-ekstraksje. Foar relatearre ekstraksjestappen, sjoch de ynstruksjes fan kommersjele RNA-ekstraksjekits. Sawol de negative as de negative
kontrôles yn dizze kit wiene belutsen by de ekstraksje.
2 PCR-reagent tarieding (gebiet foar reagent tarieding)
2.1 Helje alle ûnderdielen út 'e kit en ûntdooije en mingje by keamertemperatuer. Sentrifugearje foar gebrûk by 8.000 rpm foar in pear sekonden; berekkenje de fereaske hoemannichte reagentia, en it reaksjesysteem wurdt taret lykas werjûn yn 'e folgjende tabel:
| Komponinten | N-portsje (systeem fan 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR-reaksje-oplossing | 2 µl × N |
| *N = oantal testen samples + 1 (negative kontrôle) + 1 (nCOVpositive kontrôle) | |
2.2 Nei it goed mingen fan 'e komponinten, sintrifugearje it in koarte tiid sadat alle floeistof op 'e buiswand nei de boaiem fan 'e buis falle lit, en aliquotearje dan it 20 µl amplifikaasjesysteem yn 'e PCR-buis.
3 Sampling (gebiet foar tarieding fan eksimplaren)
Foegje 5 μl fan 'e negative en positive kontrôles ta nei de ekstraksje. It RNA fan it te testen monster wurdt tafoege oan 'e PCR-reaksjebuis.
Doch de buis goed ticht en sintrifugearje in pear sekonden by 8.000 rpm foardat jo it oerdrage nei it fersterkingdeteksjegebiet.
4 PCR-amplifikaasje (amplifisearre deteksjegebiet)
4.1 Plak de reaksjebuis yn 'e stekproefsel fan it ynstrumint, en stel de parameters as folget yn:
| poadium | Syklus nûmer | Temperatuer(°C) | Tiid | samlingside |
| Omkeardetranskripsje | 1 | 42 | 10 minuten | - |
| Pre-denaturaasjen | 1 | 95 | 1 minút | - |
| Syklus | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | jierren '30 | gegevensferzameling |
Seleksje fan ynstrumintdeteksjekanaal: Selektearje it FAM, HEX, CY5-kanaal foar it fluoreszinsjesignaal. Foar referinsjefluoreszinsje GEEN, kies asjebleaft gjin ROX.
5 Resultaatanalyse (Sjoch de eksperimintele ynstruksjes fan elk ynstrumint foar ynstelling)
Nei de reaksje, bewarje de resultaten. Nei de analyze, oanpasse de startwearde, einwearde en drompelwearde fan 'e basisline neffens de ôfbylding (de brûker kin oanpasse neffens de werklike situaasje, de startwearde kin ynsteld wurde op 3~15, de einwearde kin ynsteld wurde op 5~20, oanpassing) yn 'e logaritmyske grafyk. By de drompel fan it finster is de drompelline yn 'e logaritmyske faze, en de fersterkingskurve fan 'e negative kontrôle is in rjochte line of ûnder de drompelline).
6 Kwaliteitskontrôle (In proseduerele kontrôle is opnommen yn 'e test) Negative kontrôle: Gjin dúdlike fersterkingskurve foar FAM-, HEX-, CY5-deteksjekanalen
COV positive kontrôle: dúdlike amplifikaasjekromme fan FAM- en HEX-deteksjekanalen, Ct-wearde ≤32, mar gjin amplifikaasjekromme fan CY5-kanaal;
Oan de boppesteande easken moat tagelyk foldien wurde yn itselde eksperimint; oars is it eksperimint ûnjildich en moat it werhelle wurde.
7 Bepaling fan resultaten.
7.1 As der gjin amplifikaasjekromme of Ct-wearde > 40 is yn 'e FAM- en HEX-kanalen fan it testmonster, en der in amplifikaasjekromme is yn it CY5-kanaal, kin beoardiele wurde dat der gjin 2019 nij coronavirus (2019-nCoV) RNA yn it monster is;
.2 As it testmonster dúdlike amplifikaasjekurven hat yn 'e FAM- en HEX-kanalen, en de Ct-wearde ≤40 is, kin beoardiele wurde dat it monster posityf is foar it nije coronavirus fan 2019 (2019-nCoV).
7.3 As it testmonster allinich yn ien kanaal fan FAM of HEX in dúdlike amplifikaasjekromme hat, en de Ct-wearde ≤40 is, en der gjin amplifikaasjekromme is yn it oare kanaal, moatte de resultaten opnij hifke wurde. As de opnij testresultaten konsekwint binne, kin it monster as posityf beoardiele wurde foar de nije
koroanafirus 2019 (2019-nCoV). As it resultaat fan 'e opnij teste negatyf is, kin beoardiele wurde dat it stekproef negatyf is foar it nije koroanafirus fan 2019 (2019-nCoV).
Positive oardielwearde
De ROC-krommemetoade wurdt brûkt om de referinsje-CT-wearde fan 'e kit te bepalen en de ynterne kontrôlereferinsjewearde is 40.
Ynterpretaasje fan testresultaten
1. Elk eksperimint moat wurde hifke op negative en positive kontrôles. Testresultaten kinne allinich bepaald wurde as de kontrôles foldogge oan de easken foar kwaliteitskontrôle.
2. As de FAM- en HEX-deteksjekanalen posityf binne, kin it resultaat fan it CY5-kanaal (ynterne kontrôlekanaal) negatyf wêze fanwegen systeemkonkurrinsje.
3. As it ynterne kontrôleresultaat negatyf is, en de FAM- en HEX-deteksjekanalen fan 'e reageerbuis ek negatyf binne, betsjut dit dat it systeem útskeakele is of dat de operaasje ferkeard is, en de test is ûnjildich. Dêrom moatte de samples opnij hifke wurde.
