Products
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR-deteksjekit foar 2019-nCoV
Ferwachte gebrûk
Dizze kit wurdt brûkt foar de kwalitative opspoaring fan nij coronavirus (2019-nCoV) mei help fan keelswabs, nasopharyngeale swabs, bronchoalveolêre lavagevloeistof, sputum. bewiis foar klinyske diagnoaze en behanneling.In wiidweidige analyze fan de tastân wurdt oanrikkemandearre yn kombinaasje mei de pasjint syn klinyske manifestaasjes en oare laboratoarium tests.
Ynspeksje prinsipe
De kit is basearre op ien-stap RT-PCR technology.Yn feite waarden de 2019 nije coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab- en N-genen selektearre as de amplifikaasjedoelregio's.Spesifike primers en fluorescerende probes (N-genprobes wurde markearre mei FAM en ORF1ab-probes binne markearre mei HEX) binne ûntworpen om 2019 nij-type coronavirus RNA yn samples te detektearjen.De kit omfettet ek in endogene ynterne kontrôledeteksjesysteem (ynterne kontrôlegenprobe markearre mei CY5) om it proses fan samplesammeling, RNA- en PCR-amplifikaasje te kontrolearjen, wêrtroch falske negative resultaten ferminderje.
Main komponinten
| Components | Folume(48T/set） |
| RT-PCR reaksje oplossing | 96 ul |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RNAseP Gene) | 864 µl |
| Negatyf kontrôle | 1500 µl |
| nCOV Positive kontrôle（l ORF1ab N Gene） | 1500 µl |
Eigen reagentia: RNA-ekstraksje of suveringsreagens.Negatyf / positive kontrôle: De positive kontrôle is RNA dat it doelfragmint befettet, wylst de negative kontrôle nukleïnsûrfrij wetter is.Tidens gebrûk moatte se meidwaan oan 'e ekstraksje en moatte wurde beskôge as besmetlik.Se moatte wurde behannele en ôffierd yn oerienstimming mei relevante regeljouwing.
It ynterne referinsjegen is it minsklike RNAseP-gen.
Opslach betingsten en ferfaldatum
-20 ± 5 ℃, foarkom werhelle befriezing en thawing mear as 5 kear, jildich foar 6 moannen.
Tapaslik ynstrumint
Mei FAM / HEX / CY5 en oare multi-kanaal fluorescent PCR ynstrumint.
Eksemplareasken
1.Applicable specimen types: keel swabs, nasopharyngeal swabs, bronchoalveolar lavage fluid, sputum.
2. Samling fan eksimplaren (aseptyske technyk)
Pharyngeal swab: Wiskje de tonsillen en efterste faryngeal muorre mei twa swabs tagelyk, dan dompelje de swab kop yn in test buis mei de sampling oplossing
Sputum: Nei't de pasjint in djippe hoest hat, sammelje de hoest sputum yn in testbuis mei skroefdop mei de sampling-oplossing;bronchoalveolêre lavage fluid: Sampling troch medyske professionals.3.Storage en ferfier fan samples
Eksimplaren foar firusisolaasje en RNA-testen moatte sa gau mooglik hifke wurde.Eksimplaren dy't binnen 24 oeren kinne wurde ûntdutsen kinne wurde opslein by 4 ℃;dyjingen dy't net binnen 24 kinne wurde ûntdutsen
oeren moatte wurde opslein by -70 ℃ of ûnder (as d'r gjin opslachbetingst is fan -70 ℃, moatte se wêze
tydlik opslein by -20 ℃ koelkast).Eksimplaren moatte werhelle befriezen en ûntdooien tidens ferfier foarkomme.Eksamen moatte sa gau mooglik nei it sammeljen nei it laboratoarium stjoerd wurde.As monsters moatte wurde ferfierd oer lange ôfstannen, droech iis opslach wurdt oanrikkemandearre.
Test Metoaden
1 Sample ferwurking en RNA-ekstraksje (sample ferwurking gebiet)
It is oan te rieden om 200μl floeibere monster te nimmen foar RNA-ekstraksje.Foar besibbe ekstraksjestappen, ferwize nei de ynstruksjes fan kommersjele RNA-ekstraksjekits.Sawol negatyf as negatyf
kontrôles yn dizze kit wiene belutsen by de winning.
2 PCR reagens tarieding (reagens tarieding gebiet)
2.1 Fuortsmite alle ûnderdielen út de kit en thaw en mix by keamertemperatuer.Centrifuge by 8.000 rpm foar in pear sekonden foar gebrûk;berekkenje de fereaske hoemannichte reagents, en it reaksjesysteem wurdt taret lykas werjûn yn 'e folgjende tabel:
| Components | N tsjinje (25µl systeem) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR reaksje oplossing | 2 µl × N |
| *N = oantal testen testen + 1 (negative kontrôle) + 1 (nCOVpositive kontrôle) | |
2.2 Nei it yngeand mingen fan de komponinten, sintrifuge foar in koarte tiid om alle floeistof op 'e buismuorre nei de boaiem fan' e buis te fallen, en dan it 20 µl-amplifikaasjesysteem yn 'e PCR-buis.
3 Sampling (gebiet foar tarieding fan eksimplaren)
Foegje 5μl fan 'e negative en positive kontrôles nei ekstraksje ta.It RNA fan it te testen stekproef wurdt tafoege oan 'e PCR-reaksjebuis.
Dop de buis strak en sintrifuge by 8.000 rpm foar in pear sekonden foardat it oerbrocht wurdt nei it fersterkingsdeteksjegebiet.
4 PCR-amplifikaasje (fersterke deteksjegebiet)
4.1 Plak de reaksje buis yn 'e sample sel fan it ynstrumint, en set de parameters as folget:
| poadium | Syklus nûmer | Temperatuer(°C) | Tiid | samlingsite |
| Reversetranskripsje | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-denaturaasjen | 1 | 95 | 1 min | - |
| Syklus | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | data kolleksje |
Seleksje fan ynstrumintdeteksjekanaal: Selektearje it FAM、HEX、CY5-kanaal foar it fluorescinsjesinjaal.Foar referinsje fluorescent NONE, kies asjebleaft net ROX.
5 Resultaatanalyse (ferwize asjebleaft nei de eksperimintele ynstruksjes fan elk ynstrumint foar ynstelling)
Nei de reaksje bewarje de resultaten.Nei analyze, oanpasse de startwearde, einwearde en drompelwearde fan 'e basisline neffens de ôfbylding (de brûker kin oanpasse neffens de werklike situaasje, de startwearde kin ynsteld wurde op 3 ~ 15, de einwearde kin ynsteld wurde op 5 ~ 20, oanpassing) yn 'e logaritmyske grafyk.
6 Quauty-kontrôle (In proseduerekontrôle is opnommen yn 'e test) Negative kontrôle: Gjin dúdlike amplifikaasjekromme foar FAM-, HEX-, CY5-deteksjekanalenn
COV positive kontrôle: dúdlike amplifikaasjekromme fan FAM- en HEX-deteksjekanalen, Ct-wearde≤32, mar gjin amplifikaasjekromme fan CY5-kanaal;
De boppesteande easken moatte tagelyk foldien wurde yn itselde eksperimint;oars, it eksperimint is ûnjildich en moat wurde werhelle.
7 Bepaling fan resultaten.
7.1 As d'r gjin amplifikaasjekromme of Ct-wearde> 40 is yn 'e FAM- en HEX-kanalen fan' e testmonster, en d'r is in amplifikaasjekromme yn it CY5-kanaal, kin wurde beoardiele dat d'r gjin 2019 nij coronavirus is (2019-nCoV) RNA yn 'e stekproef;
.2 As it testmonster dúdlike fersterkingskurven hat yn 'e FAM- en HEX-kanalen, en de Ct-wearde is ≤40, kin wurde beoardiele dat it stekproef posityf is foar it nije coronavirus fan 2019 (2019-nCoV).
7.3 As it testmonster in dúdlike amplifikaasjekromme hat allinich yn ien kanaal fan FAM of HEX, en de Ct-wearde is ≤40, en d'r is gjin amplifikaasjekromme yn it oare kanaal, moatte de resultaten opnij hifke wurde.As de retest resultaten binne konsekwint, de stekproef kin wurde beoardiele te wêzen posityf foar de nije
coronavirus 2019 (2019-nCoV).As it hertestresultaat negatyf is, kin it wurde beoardiele dat de stekproef negatyf is foar 2019 nij coronavirus (2019-nCoV).
Posityf oardiel wearde
De ROC-krommemetoade wurdt brûkt om de referinsje-CT-wearde fan 'e kit te bepalen en de referinsjewearde foar ynterne kontrôle is 40.
Ynterpretaasje fan testresultaten
1.Elk eksperimint moat wurde hifke foar negative en positive kontrôles.Testresultaten kinne allinich wurde bepaald as kontrôles foldogge oan easken foar kwaliteitskontrôle
2.As de FAM- en HEX-deteksjekanalen posityf binne, kin it resultaat fan it CY5-kanaal (ynterne kontrôlekanaal) negatyf wêze troch systeemkompetysje.
3.As de ynterne kontrôle resultaat negatyf is, as de FAM- en HEX-deteksjekanalen fan 'e testbuis ek negatyf binne, , betsjut dat it systeem is útskeakele of de operaasje is ferkeard, t de test is ûnjildich.Dêrom moatte de samples opnij hifke wurde.
